Масс-спектрометрическое определение изотипа кор-антигена вируса гепатита С

Цель. Предложить способ определения изоформы кор-антигена вируса гепатита С в сыворотке крови человека.

Материалы и методы. Материалом исследования служили образцы сывороток крови, полученные от пациентов, инфицированных вирусным гепатитом С по данным ПЦР. С помощью аффинных реагентов, в качестве которых выступали плоские чипы с иммобилизованными на поверхности моноклональными антителами против кор-антигена вирусного гепатита С, осуществлялось концентрирование целевого белка. Регистрацию пептидных фрагментов молекул, сконцентрированных на поверхности плоских чипов, выполняли на времяпролетном масс-спектрометре Autoflex III MALDI-TOF/TOF (Bruker Daltonics, Германия). Идентификацию белков проводили с помощью протеомной поисковой машины Mascot с достоверностью более 95%.

Результаты. Было проведено обогащение поверхности аффинных реагентов молекулами кор-антигена из пятнадцати образцов сыворотки крови пациентов, инфицированных вирусным гепатитом С, с последующей прямой масс-спектрометрической идентификацией. В 14 образцах были выявлены изоформы кор-антигена Q8V7V3, Q66VB3, O71242, соответствующие генотипу 1b и изоляту HC-J2, в одном образце – изоформа Q68692, соответствующая генотипу 2с, изоляту HC-J7. В большинстве образцов сывороток крови (в 12 образцах из 15) была выявлена изоформа Q8V7V3. Гомологичность аминокислотных последовательностей всех четырех изоформ составила 89–96%.

Заключение. Предложен новый способ определения изоформы кор-антигена вирусного гепатита С в образцах биоматериала. Способ основан на комбинации специфического обогащения поверхности аффинных реагентов молекулами целевого белка с последующей масс-спектрометрической идентификацией. Масс-спектрометрический анализ позволяет не только достоверно идентифицировать кор-антиген вирусного гепатита С в образце биоматериала, но и определить его изоформу.

Ключевые слова: аффинное обогащение, изоформа, кор-антиген, масс-спектрометрическая идентификация.

Для цитирования: Кайшева А.Л., Иванов Ю.Д., Французов П.А., Учайкин В.Ф., Конев В.А., Арчаков А.И. Масс-спектрометрическое определение изотипа кор-антигена вируса гепатита С. Инфекционные болезни. 2016; 14(4): 51–55.
DOI: 10.20953/1729-9225-2016-4-51-55
Статья находится открытом доступе. Читать статью...

Яндекс.Метрика